WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)的原理及基本過程

更新時(shí)間：2020-02-19

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　　Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測(cè)。

　　一：WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)原理：

　　1、WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測(cè)物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。

　　2、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

　　以上是小編為大家講解的原理，那么小編接下來進(jìn)一步講解基本過程有哪些？

　　二：WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)基本過程：

　　1、獲取細(xì)胞或組織裂解物。

　　2、根據(jù)檢測(cè)蛋白的位置選擇合適的裂解buffer。

　　3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

　　4、蛋白定量。

　　5、電泳分離蛋白質(zhì)。

　　6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測(cè)目的和待測(cè)蛋白的特性,選擇合適的膜類型。

　　7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn)，降低背景。

　　2、一抗孵育。

　　以上就是小編為大家介紹的全部?jī)?nèi)容，希望對(duì)大家有所幫助。

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